Le Kit de QF-PCR Aneufast™ contient un set de 6 mélanges de 35 marqueurs au total qui sont utilisés pour amplifier des régions microsatellitaires bien précises sur l’ensemble des 5 chromosomes X,Y,21,13 et 18 ainsi que la région Amelogenin-SRY du chromosome Y.

Cette combinaison de marqueurs permet de détecter les aneuploidies concernant les chromosomes X, Y, 21, 13 et 18. Aneufast est prévu pour être utilisé à partir de l’ADN extrait amplifié provenant d’échantillons prénataux frais, tels que les liquides amniotiques, prélèvement de chorion, ou sang fœtal. Il peut également être utilisé pour une analyse postnatale, sur sang d’adulte ou échantillon tissulaire.

Deux sets multiplex de QF-PCR (S1 et S2) sont utilisés pour la recherche initiale d’Aneuploidie et chaque essai est « designer » pour être analysé par une simple électrophorèse ; il y a également 5 sets de marqueurs chromosome spécifique (M21, M13, M18 et MXY). Ils sont utilisés si tous les marqueurs de S1 et S2 sont non informatifs (Homozygote). Cependant, ils peuvent être utilisés individuellement pour le diagnostic seul de la trisomie 13, 18, 21 et les aneuploidies des chromosomes X et Y.

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Le mélange XY comporte un marqueur non polymorphique d’un gène paralogue, TAF9L, présent sur le chromosome 3 et le chromosome X.

Détection des Aneuploîdies du Chromosome X par analyse en QF PCR de TAF9L (Du haut vers le bas)

- Monosomie du chromosome X (Syndrome de Turner) est déterminé par la double dose du produit spécifique du chromosome 3 comparé au produit du chromosome X. Dans ce cas les allèles simples doivent être détectés pour tous les marqueurs STR des chromosomes sexuels en l’absence de séquence spécifique du chromosome Y(AMXY et SRY

- Deux pics de tailles équivalentes et d’intensités semblables (ratio 1 :1) indique la présence de deux chromosomes X

- Une valeur de ratio au-delà de (0,7 :1) est en faveur d’un produit spécifique du chromosome X et indique la présence de trois chromosomes X. Dans ce cas, les marqueurs STR des chromosomes sexuels doivent donner un profil de triploïdies.

Les avantages

Analyse de fragments avec 5 fluorochromes
Tampon pour Hot Start Polymerase PCR Ajouter simplement l’ADN
De la réception de l’échantillon aux résultats en 3H30 seulement
Marqueurs supplémentaires pour 13, 18, 21, X, Y sont fournis avec chaque kit
Prêt à l’emploi (Pas de mélange à faire)
Stable à 4°C
Analyse des 5 chromosomes en un seul test et en une seule électrophorèse
4 marqueurs pseudo-autosomaux
Aucun marqueur additionnel nécessaire
Double vérification avec deux tubes différents
35 Marqueurs STR au total
Optimisé pour fonctionner avec les séquenceurs Applied Biosystems
Fourniture gratuite de logiciel pour séquenceur Applied Biosystems afin d’assurer une analyse simple et fiable.
Pour utilisation IVD selon la directive 98/79/EC et fabriqué selon la norme ISO 9001:2000/ISO13485:2003

Détails du produit Aneufast

Kit Multiplex en QF-PCR pour le diagnostic rapide des trisomies 21, 18, 13 et les aneuploidies des chromosomes X et Y

Analyse de fragment avec 5 fluorochromes

Le kit de QF-PCR Aneufast utilise un marquage avec 5 fluorochromes pour l’analyse automatisée des fragments d’ADN. Ceci permet l’amplification multiplex et l’analyse en électrophorèse de 20 Loci simultanément. Le kit doit être utilisé sur les instruments d’analyse génétique ABI PRISM® d’Applied Biosystems. Les fluorochromes utilisés sont : 6-FAM™, VIC™, NED™ et PET™ et GS 500 LIZ™ (Applied Biosystems PNº 4322682)

Taq Polymerase pour Hot Sart et tampon PCR optimisé

Afin d’optimiser la spécificité de la PCR Multiplex, la Taq polymerase pour Hot Start est incluse dans le tampon PCR qui est optimisé. L’enzyme est totalement inactive à température ambiante, ce qui donne une meilleure sécurité avant de lancer la PCR. L’activation est obtenue après 15 minutes à 95°C avant les étapes de PCR. Ceci simplifie la mise en route de la PCR qui peut être faite aisément à température ambiante.

Conditions de stockage du kit

Les primers fluorescents doivent être stockés à l’abri de la lumière. L’emballage du Kit Aneufast et conçu de façon à protéger au maximum les différents tubes de la lumière.

Aneufast peut être conservé pendant 1 an à -20°C

Le Kit de QF-PCR Aneufast

S1/ S2

Les deux sets Multiplex de QF-PCR S1 et S2 permettent simultanément l’analyse de 5 STRs pour chaque autosomes, 21, 18 et 13, et en complement pour des chromosomes sexuels, avec l’utilisation combinée de deux STRs pseudoautosomaux avec l’Amelogenin (AMXY) et SRY. Ces séquences non-polymorphiques pour la détermination du sexe sont amplifies indépendamment. La collecte des résultats de l’analyse simultanée en électrophorèse pour les marqueurs S1 et S2 doit être concordant avec les sets MXY, M21, M18 et M13

Les sets de marqueurs spécifiques pour les chromosomes sont également disponibles. MXY contient 5 STRs et 2 marqueurs pour la détermination du sexe, M21, M13 et M18 contiennent 5 STRs pour chaque chromosome 21 et 18 et 5 marqueurs pour le chromosome 13. Les sets de marqueurs spécifiques peuvent êtres utilisés indépendamment ou au cas où tous les marqueurs S1 et S2 sont non informatifs (Homozygotes).

Noter que pour chaque set de chromosome spécifique, deux marqueurs amplifiés dans S1 et S2 sont répétés. Ceci donne l’opportunité de confirmer l’identité d’un échantillon.

Ces sets chromosomes spécifiques, permettent également de confirmer un résultat anormal. L’inclusion de plusieurs marqueurs augmente la précision du diagnostic.

Le mélange XY comporte un marqueur non polymorphique d’un gène paralogue, TAF9L, présent sur le chromosome 3 et le chromosome X.

Le Kit de QF PCR Aneufast™ inclus dorénavant un total de 35 marqueurs

Les nouveaux marqueurs sont :

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Plus d’information

Pour une meilleure compréhension du Kit Aneufast, télécharger :

Downloads

Aneufast™ full product instruction manual, click the PDF image to view or download

Aneufast™ troubleshooting manual, click the PDF image to view or download

Most markers included in Aneufast™ have been extensively validated and applied on over 30.000 clinical specimens.