HistoGene™ LCM , Kit de coloration des coupes en congélation.

Obtenir une coloration supérieure tout en préservant les ARNs

L’ HistoGene est une solution spéciale pour la coloration des coupes de tissus afin de faire de la microdissection laser dans le but d’étudier les ARNs. C’est une coloration très rapide  qui permet d’obtenir un bon contraste par différents colorants spécifiques du noyaux (Violet) et du Cytoplasme (Rose claire). En minimisant l’exposition des tissus à l’eau qui peut réactiver les Rnases, l’HistoGene permet de préserver l’intégrité des ARNs qui pourrait être compromis en utilisant des protocoles de coloration plus long.

Exemples de tissu préparé avec le kit HistoGene

HistoGene™ LCM Retient les ARNs de faibles abondances

Une analyse par RT-PCR de gènes spécifiques de cellules microdisséquées à partir d’un tissu congelé et coloré avec le Kit HistoGene montre la rétention des Arns de faibles abondances ainsi que celle des ARNs de plus forte abondance. Le profil des ARN m des échantillons traités par HistoGene ne montre aucune dégradation.

Detection of low-abundance mRNA in HistoGene samples. RT-PCR was performed on RNA from 500 cells captured from mouse liver and kidney. Equal quantities of cDNA were analyzed with three primer sets (Stratagene): Elongation Factor 1-a (EF-1a, high-abundance gene, ~3000 copies/cell, 187 bp), Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase (GAPDH, medium- abundance gene, 300-3000 copies/cell, 357 bp), and Protein Phosphatase 1 (PP1, low-abundance gene, <300 copies/cell, 498 bp). Samples were run on a 6% acrylamide gel, and stained using SYBRâ Gold Nucleic Acid Gel Stain (Molecular Probes). M: molecular weight markers. Lane 1: kidney EF-1a. Lane 2: liver EF-1a. Lane 3: kidney GAPDH. Lane 4: liver GAPDH. Lane 5: kidney PP1. Lane 6: liver PP1. Lane 7 liver EF-1a no RT control, Lane 8: no RT template control.

For laboratory use.

HistoGene™ LCM

Maintien l’intégrité des ARNs

Les tissus préparés pour la LCM utilisant les réactifs du Kit HistoGen, permettent d’obtenir un bon rendement et une très haute qualité des ARNs. Les données obtenues à partir d’analyses électrophorétiques de l’ARN total, et des analyses en RT PCR de gènes spécifiques confirment

Comparison of RNA isolated from intact tissue and HistoGene-prepared LCM samples. RNA samples were prepared from an intact frozen section (lane 2), cells captured from a section stained and dehydrated using the HistoGene Kit (lane 1), and cells captured from a section that was dehydrated butnot stained (lane 3). Electrophoretic analysis of total cellular RNA isolated from mouse liver on an Agilent Bioanalyzer 2100. Note 18S and 28S bands of comparable intensity in both LCM samples and intact tissue.

For laboratory use.

HistoGene™ LCM

Utilisé avec d’autres produits Arcturus pour produire des MicroArrays de qualités

Le kit HistoGene de coloration pour coupes de tissus congelées est l’un des produits de la gamme croissante d’Arcturus dédiée pour l’obtention des puces d’expressions. L’utilisation de Picopure™ RNA pour l’extraction des ARNs, permet l’obtention d’ARN avec un haut rendement dans un volume minimum à partir de 10 cellules. Les quelques nanogrammes d’ARN obtenus  en utilisant ce kit peuvent êtres amplifiés à quelques microgrammes grâce à l’utilisation du Kit RiboAmp™ pour l’amplification des ARNs. Ce kit permet d’obtenir des ARNa prêt pour le marquage et l’hybridation pour les puces. Utilisés conjointement  avec l’instrumentation Arcturus XT,  les kits augmentent la fiabilité et la reproductibilité des études d’expression de gènes en « microarrays ».

Expression microarray of RNA from LCM samples using HistoGene, PicoPure and RiboAmp kits. Mouse kidney sections were prepared using the HistoGene Kit and cells captured from the collecting ducts and glomeruli using CapSure HS LCM caps. RNA was isolated using the PicoPure RNA Isolation Kit and amplified using the RiboAmp RNA Amplification Kit. Amplified RNA was converted to Cy5 labeled cDNA and hybridized onto separate microarrays composed of 3000 mouse ESTs and scanned. Spot images were converted to pseudocolor and overlayed. Red spots show genes expressed in duct cells only, green spots glomeruli only, and yellow spots genes expressed in both structure types.

For laboratory use.

HistoGene™ LCM

Obtenir une haute qualité d’ARN à partir de plusieurs types de tissus

Applied Biosystems a validé le kit HistoGen en examinant l’intégrité des ARNs sur différents types de tissus. Tous les types de tissus testés à ce jour avec l’utilisation du kit HistoGen ont permis de récupérer avec un bon rendement, une excellente qualité des ARNs.

For laboratory use.